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利用改良抑制消减杂交方法建立再生障碍性贫血CD4^＋T细胞的基因差异表达文库
基因水平来讲都需要特定基因的选择性表达。我们利用抑制消减杂交的方法建立再障CD4T细胞中差异表达的基因文库，在基因文库构建巾，为最大限度减少假阳性率，增加特异性，我们在原有抑制消减杂交方法基础上进行改良,[link widoczny dla zalogowanych]，即利用微量离心滤过柱纯化方法，在三次杂交反应基础上建立了一种改良抑制消减杂交的方法,[link widoczny dla zalogowanych]，使共同表达的基因序列通过增加的一次杂交反应得到更充分的消减，最大限度地保证所建立的文库尽可能只包含有在再障CIMT细胞中特异表达的基因，结果所获得的文库经过PCR鉴定证实其有效率高达88％(大于80％有效率的预期目标)，充分体现了该方法的优越性。对该文库的基因进行选择性的测序和功能分析，我们可以看到这些基因主要分为4类：①与蛋白合成、生物氧化有关的基因，如还原型烟酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位2、核糖体蛋白；②与细胞增殖调控有关的基凶，如f扰素诱导基因家族；③与细胞活化有关的蛋白激酶，如现代人类淋巴细胞特异性蛋自酪氨酸激酶(LCK)等；④参与细胞内信号转导的癌基因，如T细胞特异性转录因子(TCF—1)。其中干扰素诱导基因家族是表达于细胞膜上的1个相对分子质量为17×10的糖蛋白,[link widoczny dla zalogowanych]，与干扰素介导的细胞增殖抑制密切相关。既往的研究表明，干扰素一是参与再障造血抑制的重要造血负调控因子，因此我们推测该基因在CD4T细胞中特异表达可能参与了CD4T细胞的增殖调控,[link widoczny dla zalogowanych]，并可能在再障由T细胞和造血细胞等所组成的干扰素应答环路调节中起作用。这些基因在再障免疫病理损伤中的作用尚未见报道。这些基因的发现无疑为揭示再障CD4T细胞异常增殖、活化及产生骨髓抑制的机制奠定了基础。
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