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 Wysłany: Wto 11:25, 01 Mar 2011 Temat postu: uggs boots italia 抗CD30L／CD153 |
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抗CD30L／CD153单克隆抗体的制备与初步鉴定
0L的多克隆抗体为阳性对照,[link widoczny dla zalogowanych]。收集杂交瘤培养上清，用于小鼠mAbIg类和亚类的鉴定。按常规方法制备小鼠腹水。1．2．2抗CD30LmAb特异性的鉴定1IxgpYFP—CD30L基因瞬时转染的293T细胞，24h后用抗CD30LmAb进行间接免疫荧光染色，同时设空载体转染的293T细胞和小鼠lgG为空白对照和阴性抗体对照，流式细胞术检测。以CD30L—YFP基因转染的293T细胞裂解液作SDS—PAGE和Westernblot，检测抗CD30LmAb的特异性。收稿日期：2005—03—28；修回日期：2005—04—29基金项目：中国人类肝脏蛋白质组计划课题资助(2005年度)作者简介：许晓光(1977一)，女，山东宁津人，博士生．Fel：(029)83374531,[link widoczny dla zalogowanych]；Email：xxgxdxl@fmnm．edu．cn$Correspondingauthol2结果和讨论共获得稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株3株．分别命名为FMU—CD30LI、FMU—CD30L2和FMU—CD30L3。3株mAb的腹水效价为1×10～1×10～，Ig亚类均为IgG1。3株mAb均可识别CD30L．YFP基因转染的293T细胞膜表面表达的天然CD30L分子(图1)。此外，FMU—CD30L3还可在Westernblot中识别变性的CD30L—YFP融合蛋白，其相对分子质量(M)约为450OO(其中含M40OO的YFP蛋白)，与预期相符。lIr埘l姒FMu．CD30Ll耋l0“l0’10l0101010’101010FLlFLlYFP荧,[link widoczny dla zalogowanych]，匕强度YFP荧光强度图1抗CD301mAb识别pYFP—CD30L转染293T细胞表达的CD30L我们应用真核表达的CD30L为免疫原．采用常规B淋巴细胞杂交瘤技术，成功制备了3株抗人CD30LmAb并进行了初步鉴定。经鉴定,[link widoczny dla zalogowanych]，3株mAbFMU—CD30LI、FMU—CD30L2和FMU—CD30L3均可结合CD30L—YFP转染的293T细胞膜表面的天然CD30L分子．其中FMU—CD30L3还可识别变性的CD30L蛋白,[link widoczny dla zalogowanych]。这为进一步研究CD30L的表达、结构和功能．探索其在生理及病理状态中的作用提供了有效手段。
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